Cómo utilizar científica y correctamente el tubo de criopreservación
El uso del tubo de criopreservación es una ciencia, no una simple trilogía como abrir el tanque de nitrógeno líquido, colocarlo en el tubo de criopreservación y cerrar el tanque de nitrógeno líquido.El uso científico y correcto de los tubos de criopreservación puede evitar la pérdida de muestras y proteger la seguridad de los evaluadores.
El uso del tubo de criopreservación es una ciencia, no una simple trilogía como abrir el tanque de nitrógeno líquido, colocarlo en el tubo de criopreservación y cerrar el tanque de nitrógeno líquido.El uso científico y correcto de los tubos de criopreservación puede evitar la pérdida de muestras y proteger la seguridad de los evaluadores.
Tubo de congelación: pasos de congelación
Lave las células con solución de PBS precalentada, succione la solución y cubra las células con una solución que contenga tripsina y EDTA (una capa líquida delgada es suficiente y la concentración de tripsina y EDTA debe determinarse según la línea celular).
Incubar las células a 37 ℃ durante 3-5 minutos.
Después de que las células se desprenden del fondo, se termina la incubación, se añade el medio que contiene suero y las células se suspenden suavemente con una pipeta.
Centrifugar la suspensión celular (500 xg, 5 min) y resuspendir con el medio que contiene suero.
Conteo de células.
Centrifugar la suspensión celular (500 xg, 5 minutos), retirar el sobrenadante y resuspendir las células con un medio que contenga suero de volumen adecuado.
Mezcle las células y la solución de criopreservación (60% de medio, 20% de suero bovino fetal, 20% de DMSO) en una proporción de volumen de 1:1 y luego transfiéralas al tubo de criopreservación Cryo STM.La densidad de las células congeladas es de 1-5 × 106 piezas/ml.
Se recomienda que el tubo de criopreservación STM de células criogénicas se enfríe a una velocidad de - 1 K/min, y el tubo de criopreservación se puede colocar en un recipiente que contenga isopropanol a - 70 ℃.Si el tubo de criopreservación Cryo STM almacena otras muestras, se pueden colocar directamente a − 20 ℃, − 70 ℃ o la fase gaseosa del nitrógeno líquido.Para garantizar que la muestra se congele de manera uniforme, se deben colocar 4 ml y 5 ml de tubo de criopreservación criogénica sTM en el refrigerador a -20 ℃ durante la noche y luego transferirlo a la fase gaseosa de -70 ℃ o nitrógeno líquido.
Luego transfiera el tubo de criopreservación Cryo.sTM al tanque de nitrógeno líquido.Para evitar la contaminación (como micoplasma) y consideraciones de seguridad, coloque el tubo de criopreservación Cryo.sTM en la fase gaseosa del nitrógeno líquido, no en la fase líquida.
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Hora de publicación: 25 de noviembre de 2022